kerafast pCAG-GBP7-p65AD質(zhì)粒

pCAG-GBP7-p65AD與pCAG-Gal4DBD-GBP2一起用于激活表達(dá)GFP的細(xì)胞中UAS調(diào)控的基因。該載體允許交換與該載體中GBP7的C-末端融合的激活域（AD）或其他蛋白質(zhì)。

綠色熒光蛋白（GFP）及其衍生物是跨模型生物的基因表達(dá)的常用標(biāo)記。值得注意的是，在小鼠中，已經(jīng)產(chǎn)生了成千上萬個轉(zhuǎn)基因GFP系。這些試劑揭示了許多基因的表達(dá)模式，并用作標(biāo)記特定細(xì)胞類型的試劑。為了擴(kuò)展轉(zhuǎn)基因GFP系的效用，使人們可以使用GFP直接操縱GFP標(biāo)記的細(xì)胞類型中的任何所需基因，我們開發(fā)了一種合成系統(tǒng)，該系統(tǒng)使用GFP作為支架蛋白來誘導(dǎo)雜交轉(zhuǎn)錄因子的形成。GFP的識別是由GFP結(jié)合蛋白（GBP）介導(dǎo)的，該蛋白是來源于駱駝科動物抗體的單鏈GFP結(jié)合域。特定的GBP對能夠?qū)⑺┫档腄NA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DBD）和激活結(jié)構(gòu)域（AD）整合到GFP支架上。然后，這種復(fù)合物可以觸發(fā)任何由上游激活序列（UAS）調(diào)控的基因的誘導(dǎo)。

技術(shù)指標(biāo)

文獻(xiàn)資料

筆記

pCAG-GBP7-p65AD是哺乳動物表達(dá)載體，旨在表達(dá)GFP依賴性轉(zhuǎn)錄因子的激活域（AD）部分。具體而言，p65 AD連接到GBP7的C末端。來自SV40大T抗原的核定位信號被添加到融合蛋白的N末端。融合蛋白的轉(zhuǎn)錄由早期CMV增強(qiáng)子/β-肌動蛋白啟動子驅(qū)動，并由兔β-球蛋白聚腺苷酸化信號終止。將Kozak共有序列（GCCACC）直接放在起始ATG的前面，以提高翻譯效率。質(zhì)粒中的氨芐青霉素抗性基因允許在大腸桿菌中進(jìn)行選擇。SV40 ori序列使質(zhì)粒能夠在表達(dá)SV40大T抗原的細(xì)胞（例如293T和COS-7細(xì)胞）中游離復(fù)制。