molzym D-321-050說(shuō)明書

微生物 DNA 的分離

MolYsis™ Complete5

樣本預(yù)處理和細(xì)菌/真菌 DNA 分離試劑盒，用于全血和其他體液的無(wú)背景 PCR 分析

小樣本量 (≤1 mL) 中等樣本量 (5 mL)

MolYsis Complete5 試劑盒包括用于以下微生物 DNA 純化步驟的所有成分：

人/動(dòng)物細(xì)胞裂解
人/動(dòng)物 DNA 降解
革蘭氏陽(yáng)性和  革蘭氏陰性菌和真菌
PCR 抑制劑的去除
微生物 DNA 純化
 

Kit Contents – MolYsis™ Complete5  50 reactions 100 reactions  Extraction Buffers (store at +18 to +25°C) SU 1x 50ml  2x 50ml  CM 1x 100ml  2x 100ml  DB1 1x 100ml  2x 100ml  RS 1x 50ml  2x 50ml  RL 1x 5ml  2x 5ml  RP 1x 7.5ml  2x 7.5ml  CS 1x 12.5ml  2x 12.5ml  AB 1x 12.5ml  2x 12.5ml  WB 1x 20ml  2x 20ml  70% Ethanol 1x 20ml  2x 20ml  Deionized water 1x 5ml  2x 5ml   Enzymes & Reagents (store at -15 to -25°C) MolDNase B, solution 1x 0.5ml  2x 0.5ml  BugLysis, solution  1x 1.0ml  2x 1.0ml  ? -mercaptoethanol, solution 1x 0.08ml  2x 0.08ml  Proteinase K, solution ? 1x 1.0ml  2x 1.0ml   Consumables (store at +18 to +25°C) Spin columns in 2.0ml Collection tubes 1x 50  2x 50  Collection tubes, 2.0ml 2x 50  4x 50  Elution tubes, 1.5ml 1x 50  2x 50   Manual  Manual 1x 1x
 

本手冊(cè)規(guī)定的試劑盒完整性能的儲(chǔ)存和穩(wěn)定性保證僅在遵循儲(chǔ)存條件時(shí)有效。  請(qǐng)注意，MolDNase B、BugLysis、-巰基乙醇和蛋白酶 K 在-15 至-25 ℃ 下處理和儲(chǔ)存。  緩沖液和耗材應(yīng)在室溫（+ 18 至 + 25 ℃）下儲(chǔ)存。在規(guī)定條件下，可保證試劑盒的完整性能長(zhǎng)達(dá) 24 個(gè)月。

產(chǎn)品使用限制本產(chǎn)品僅供研究使用，不用于診斷程序。

緩沖液 CM 和 CS 分別含有鹽酸胍和硫氰酸胍，當(dāng)與次氯酸鹽或其他酸性溶液結(jié)合時(shí)，可形成高活性的化合物和有毒氣體。如果含有這些緩沖液的液體溢出，使用適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)室清潔劑和水進(jìn)行清潔。如果溢出的液體中含有潛在的傳染性物質(zhì)，首先用實(shí)驗(yàn)室清潔劑和水清潔受影響的區(qū)域，然后用 70% (v/v) 乙醇清潔。本試劑盒僅供經(jīng)過培訓(xùn)的熟練人員使用，操作感染性材料和分子生物學(xué)方法。為避免處理過程中 DNA 污染試劑和傳染性病原體感染用戶導(dǎo)致的錯(cuò)誤分析結(jié)果，請(qǐng)始終佩戴無(wú)菌防護(hù)手套、一次性袖套、實(shí)驗(yàn)服和護(hù)目鏡。根據(jù)制造商的說(shuō)明手冊(cè)，開始前在經(jīng) UV 輻照的 II 級(jí)生物安全柜中工作。工作期間必須關(guān)閉紫外燈。按照制造商的說(shuō)明維護(hù)工作站。根據(jù)衛(wèi)生組織的國(guó)家指令（例如，Richtlinieüber die ordnungsgemäße Entsorgung von Abfällen aus Einrichtungen des Gesundheitsdienstes，2002），處置潛在傳染性材料和樣本制備廢棄物?？筛鶕?jù)要求提供所用化學(xué)品的單獨(dú)材料安全數(shù)據(jù)表。Molzym 保留更改或修改產(chǎn)品以提高套件性能的權(quán)利。
 

簡(jiǎn)介
Kit Description 臨床材料和動(dòng)物系統(tǒng)（如血液和其他體液）液體樣本中致病菌和真菌的分子分析會(huì)受到宿主和死細(xì)胞 DNA 高背景的嚴(yán)重干擾。除 PCR 抑制劑外，細(xì)菌和真菌序列特異性引物與宿主序列的非特異性結(jié)合可對(duì)病原體分析產(chǎn)生負(fù)面影響。Molzym 通過 MolYsis™Complete5 開發(fā)了一種工具，用于富集細(xì)菌和真菌細(xì)胞，并從血液和其他液體中分離富集的微生物 DNA。MolYsis™Complete5 是去除樣品中 PCR 抑制劑和宿主及死細(xì)胞 DNA 的完整解決方案，可通過 PCR 或?qū)崟r(shí) PCR 可靠靈敏地檢測(cè)微生物病原體。  MolYsis™Complete5 允許從人和動(dòng)物體液樣本中分離微生物 DNA：i）來(lái)自例如兒科患者或動(dòng)物的 1 mL 樣本。ii）成人患者 5 mL 樣本。

評(píng)價(jià)樣本：人源性：全血（含抗凝劑）、滑液、胸水、腦脊液、腹水、膿液、支氣管肺泡灌洗液、鼻灌洗液、尿液。  動(dòng)物來(lái)源：來(lái)自鳥類、小鼠、大鼠和猴的全血（含抗凝劑）、倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞培養(yǎng)物（每份樣品≤5*108 個(gè)細(xì)胞）、猴腎細(xì)胞培養(yǎng)物、哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物。

MolYsis™Complete5 Technology MolYsis™Complete5 是 Molzym 的專有專有技術(shù)，能夠從液體臨床樣品和用于分子分析的動(dòng)物模型材料中富集和純化微生物 DNA。該程序包括以下方案：  i）人/動(dòng)物 DNA 去除。ii）普遍裂解革蘭陰性菌和革蘭陽(yáng)性菌以及真菌。iii）微生物 DNA 的分離。  獲得耗盡宿主 DNA 的微生物 DNA 制劑只需要三個(gè)步驟（圖 1）。1）：I）向液體樣品中加入離液緩沖液可裂解宿主細(xì)胞，而微生物細(xì)胞不受影響。宿主細(xì)胞以及死亡細(xì)胞釋放的 DNA 被 Molzym 專有的、抗混沌的 MolDNase B.Ⅱ）降解微生物細(xì)胞沉淀，用 BugLysis 試劑處理，降解革蘭陰性菌、革蘭陽(yáng)性菌和真菌的細(xì)胞壁后再經(jīng)蛋白酶 K 處理消化。三）提取微生物 DNA，然后通過快速的結(jié)合-洗滌-洗脫程序進(jìn)行分離，采用 Molzym 的 CCT 技術(shù)，DNA 定量結(jié)合到過濾器基質(zhì)上，從色譜柱中回收微生物 DNA 高